戴金宁，李富金，杨景晁，战汪涛
（1.山东省畜牧总站，山东 济南 250022；2.齐鲁动物保健品有限公司，山东 济南 250105）
肉鸡专用新流二联灭活疫苗的实验研究及临床使用效果研究*
戴金宁1，李富金2，杨景晁1，战汪涛1
（1.山东省畜牧总站，山东 济南 250022；2.齐鲁动物保健品有限公司，山东 济南 250105）
利用新型101佐剂制备肉鸡专用新流二联灭活疫苗，与进口白油佐剂新流二联灭活疫苗进行SPF鸡、AA肉鸡免疫比较，结果表明：试验一，SPF鸡10日龄免疫，免疫后7d，肉鸡专用新流组H9、ND抗体水平明显优于对照组；试验二，AA肉鸡7日龄免疫，肉鸡专用新流组禽流感H9抗体水平明显优于对照组，新城疫抗体对比不明显；试验三，AA肉鸡不同公司不同免疫日龄（1日龄、7日龄免疫）对比试验，23、30、37日龄检测新城疫、禽流感H9抗体，齐鲁肉鸡专用新流禽组流感H9抗体产生速度比同类产品及空白对照差异显着，1日龄免疫效果对比更明显；新城疫抗体对比差异不显着；试验四，田间7日龄免疫对比试验，26日龄抽检各舍抗体，齐鲁肉鸡专用新流H9抗体明显优于该公司新流，新城疫对比不明显。结果表明，齐鲁肉鸡专用新流二联灭活疫苗更适合于商品肉鸡免疫，1日龄免疫对比更明显。
肉鸡；新流二联；临床使用；研究
新城疫、低致病性禽流感（H9）都是肉鸡常见病毒性传染病，也是肉鸡养殖中危害最严重的疫病，药物治疗效果差，疫苗免疫预防发病是现在使用的有效方案。鸡新城疫、禽流感（H9）二联灭活疫苗是肉鸡常用防控两种疫病的疫苗，但是，肉鸡生长速度快，免疫系统不健全，传统灭活苗效果在肉鸡上应用还有许多提高的方面。灭活疫苗临床使用效果主要因素包括种毒毒株、佐剂、制苗工艺等。课题组人员优选制苗毒株，免疫原性好，对目前国内流行的新城疫、禽流感（H9）疾病有针对性的免疫效果；同时，为进一步提高疫苗的免疫效果，课题组人员历经多年研究，筛选出一个高效佐剂用于商品肉鸡专用灭活疫苗生产。经大量试验和临床使用跟踪表明：优选佐剂能快速激活免疫细胞，显着提高机体免疫机能，抗体产生快，大幅缩短免疫空白期，更适用于肉鸡低日龄免疫。在此基础上，精确控温灭活、高倍浓缩、均质乳化等一系列科学的生产工艺以及严格的质量控制体系，保证了产品质量的安全、高效。为商品肉鸡养殖业生产提供更有保障的高质量的产品。
1 材料与方法1.1 疫苗与血样
1.1.1 疫苗 肉鸡采用新流二联 （齐鲁动物保健品公司有限公司生产，肉鸡佐剂）；齐鲁新流二联（自制试验样，进口白油佐剂）；国产Y公司制品（批号：2014020）；国产 D公司制品 （批号：2014013）（同类制品均为山东市场集团专供公司）；田间试验肉鸡专用新流二联（批号：150316-1）；某公司新流二联（批号：2015023）。
1.1.2 血样 山东潍坊某养殖集团对比试验各个鸡舍26日龄肉鸡血样。
1.2 抗原 ND和AI-H9血凝抑制抗原均由山东某大型养殖公司提供（哈兽研生产）。
1.3 试验鸡
1.3.1 10日龄SPF鸡40只，购自济南斯帕法斯家禽有限公司。
1.3.2 1日龄AA肉鸡270只，购自山东和康源集团。
1.4 1%鸡红细胞悬液制备 采集2～3只健康非免疫SPF公鸡的血液，与等体积的阿氏液混合,用 pH7.2、0.01mol/L PBS液洗涤 3次，然后用pH7.2、0.01mol/LPBS配成 1%的红细胞悬液，4℃保存备用。
1.5 试验分组与免疫方法
1.5.1 试验一 10日龄SPF鸡40只，随机分成2组，每组20只。10日龄颈部皮下分别免疫，齐鲁肉鸡专用新流二联（自制试验样，新型101佐剂）；齐鲁新流二联（自制试验样，进口白油佐剂），免疫剂量均为0.2ml/羽。免疫后7、14、21d分别采血，分离血清，用血凝抑制（HI）试验方法测定ND和H9的HI抗体效价，比较佐剂活性差异。
1.5.2 试验二 AA肉鸡，从鸡群中挑选精神状态良好、体况相近试验鸡90只，随机分成3组，每组30只。免疫程序：1日龄申贝点眼滴鼻，7日龄实验组免疫齐鲁肉鸡专用新流二联（自制试验样，新型101佐剂）；对照组免疫齐鲁新流二联（自制试验样，进口白油佐剂），空白组不免疫，同时新支120点眼滴鼻。免疫后7、14、21d分别采血，分离血清，用血凝抑制（HI）试验方法测定ND和H9的HI抗体效价，比较佐剂活性差异。
1.5.3 试验三 AA肉鸡，从鸡群中挑选精神状态良好、体况相近试验鸡180只，随机分成6组，每组30只。免疫程序：1～3组，1日龄申贝点眼滴鼻，同时分别颈部皮下注射三个厂家新流二联，0.15ml/只、7日龄新支120点眼滴鼻；4～6组，1日龄申贝点眼滴鼻，7日龄分别颈部皮下注射三个厂家新流二联、新支120点眼滴鼻。免疫后23、30、37d分别采血，分离血清，用血凝抑制（HI）试验方法测定ND和H9的HI抗体效价，对比不同疫苗产品的免疫效果。
1.5.4 试验四 山东潍坊某集团公司田间免疫对比试验，共10栋鸡舍，两个公司新流二联各免疫5栋，免疫程序为：1日龄威立克1倍量，传支1倍量，7日龄某公司新流二联0.35ml/只或齐鲁肉鸡专用新流二联0.3ml/只；新支二联1.2倍点眼滴鼻，21日龄1、3、4、5舍新城疫2倍量。免疫后26d采血，分离血清，用血凝抑制（HI）试验方法测定ND和H9的HI抗体效价，检查不同公司疫苗产品的免疫效果。
2 试验结果2.1 试验一 结果见表1。
表1 SPF鸡免疫试验组（肉鸡专用新流）与对照组（精品新流）免疫对比结果
结果显示：疫苗中禽流感H9、新城疫效价相同，采用新型佐剂的肉鸡专用新流比进口白油佐剂的精品新流抗体产生快，免疫后7d，试验组禽流感HI抗体值达3.4，新城疫抗体达1.2，而对照组抗体滴度均小于1；免疫后14d，试验组H9-HI及ND-HI抗体比对照组高1个滴度；免疫后21d，两组抗体水平差异不显着，通过比较可以看出，试验组抗体产生速度明显优于对照组。
2.2 试验二 结果见表2。
表2 AA肉鸡免疫试验组（肉鸡专用新流）与对照组（精品新流）免疫对比结果
结果显示：免疫后14d，空白对照组鸡禽流感H9母源抗体均值下降为2.3log2，试验组禽流感H9抗体均值为 3.8log2，对照组为 3.0log2；免疫后21d，母源抗体均值下降为2.0log2；对照组为2.6 log2，试验组则高达4.6log2，免疫后28d，母源抗体持续下降到1.1log2，试验组均值比对照组高2个滴度，达5.1log2；免疫后14d、21d及28d，ND抗体母源抗体均值从1.4log2下降到0.8log2，免疫疫苗组抗体持续升高，但试验组比对照组差异不明显，仅高0.5个滴度左右。通过比较可以看出，采用新型佐剂的肉鸡专用新流的试验组比使用进口白油佐剂的精品新流的对照组禽流感H9抗体产生快，抗体水平差异显着；而新城疫抗体产生速度各日龄段对比不明显。
2.3 试验三 结果见表3。
表3 齐鲁肉鸡专用新流与其它公司新流疫苗免疫AA肉鸡的对比结果
结果显示：随着日龄增长，空白对照组鸡禽流感H9、新城疫母源抗体持续下降，30日龄左右降到1.0log2左右。不同公司新流二联免疫AA肉鸡后新城疫、禽流感H9的HI抗体比空白对照都有显着提高，齐鲁肉鸡专用新流禽流感H9-HI抗体产生速度比同类产品及空白对照高1～3个滴度，差异显着，1日龄免疫比7日龄免疫效果对比更明显；其中1日龄免疫，23日龄、30日龄、37日龄分别检测抗体，Y公司、D公司疫苗抗体上升趋势不明显，而齐鲁肉鸡专用新流可以明显检测到抗体上升，37日龄齐鲁肉鸡专用新流抗体达4.2log2，比对Y、D公司高3个多滴度，差异显着；7日龄免疫效果对比虽然没有1日龄免疫对比这幺显着，37日龄，也有2个多滴度差异。新城疫HI抗体三个公司，7日龄免疫抗体走势相同，对比差异不显着 （新城疫有活疫苗免疫因素存在），1日龄免疫，齐鲁肉鸡专用新流抗体逐日上升趋势明显，其他2个公司抗体走势与空白对照趋同。
2.4 试验四 结果见表4。
表4 山东潍坊某集团公司田间免疫对比试验结果
结果显示：7日龄免疫新流，26日龄抽检各舍抗体，5个鸡舍齐鲁新流H9抗体平均值为 5.0 log2，5个鸡舍某公司新流 H9抗体平均值为 3.8 log2，齐鲁肉鸡新流H9抗体明显优于该公司新流；5个鸡舍齐鲁新流ND抗体平均值为5.5log2，5个鸡舍某公司新流ND抗体平均值为5.8log2，无明显差异。
3 小结与讨论3.1 新型佐剂新流二联在SPF鸡、商品AA肉鸡上免疫，免疫效果明显优于传统进口白油佐剂疫苗。
3.2 齐鲁肉鸡专用新流二联（新型佐剂苗）抗体产生快，日龄越小，对比结果越明显。
3.3 田间试验对比结果显示，齐鲁肉鸡专用新流二联禽流感免疫效果优于Y公司及D公司，新城疫防疫效果差异不大。
3.4 肉鸡生长快，免疫系统不健全，传统灭活疫苗抗体产生慢，一般免疫后21～28d才能出现高峰，肉鸡发病早，疫苗抗体产生不足，不能完全满足客户疫病防控需求，齐鲁肉鸡专用新流二联筛选的佐剂能快速激活免疫细胞，显着提高机体免疫机能，抗体产生快，大幅缩短免疫空白期，更适用于肉鸡低日龄免疫。
3.5 为了提高养殖效率，很多地方更换为笼养肉鸡，养殖场希望雏鸡上笼前就完成新流二联免疫，传统进口白油佐剂7日龄免疫尚可，1日龄免疫检测不到疫苗效果，不适用于1日龄商品肉鸡。
S858.312.5
B
1673-1085（2016）09-0010-04
2016-08-20
山东省财政支持农业技术推广项目“肉鸡标准化健康养殖技术推广”；山东省农业重大应用技术创新项目“山东省肉鸡业公共卫生模式建立与示范”。
戴金宁（1969-），男，助理畜牧师，大专，主要从事畜牧科技推广工作，154741270@qq.com。
