中图分类号：S852.3 文献标志码：A 文章编号：1001-4330（2025）02-0502-08
0 引言
【研究意义】猪圆环病毒（Porcinecircovirus，PCV）是目前已知最小的DNA单股病毒，其直径为 
，二十面体对称结构，同时也是可以在哺乳动物细胞内复制的最小DNA病毒之一。PCV2和PCV3病原已在全球流行，给养猪行业带来经济损失。【前人研究进展】目前PCV分为4个基因型，分别是PCV1、PCV2和新发现的PCV3、PCV4。PCV1于1974年在猪肾细胞系PK15中发现，无致病性[1]。PCV2在1998 年首次分离得到，是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原[2]。PCV3病毒可引起心脏和多系统炎症、仔猪消瘦腹泻及母猪繁殖障碍疾病等。【本研究切入点】PCV2感染猪后对机体获得性免疫能力的建立影响重大，主要包括在全身性淋巴细胞衰竭和组织细胞浸润增殖[3-7]。造肥淋巴器官的细胞凋亡，使宿主产生严重的免疫抑制效。猪只感染PCV3后会引起宿主细胞自噬、凋亡等，对先天免疫与炎症反应有一定影响，临床表现为被毛粗乱、腹式呼吸、繁殖障碍疾病等。呼吸困难、体重减轻，个别猪只会出现腹泻、黄疸等。目前新疆对PCV2和PCV3的研究较少，需阐明PCV2和PCV3在新疆的流行情况。【拟解决的关键问题】研究采集7个规模化养猪场样品检测病原，调查PCV2和PCV3流行状况，为PCV2和PCV3的防控和流行病学调查提供科学依据。
材料与方法
1.1 材料
1.1.1采样
2022年10月至2023年9月，在新疆选取7个规模化养猪场，定期前往场区采集样品，采集新生健康乳猪辜丸液样品523份，健康猪精液样品364份，病弱猪血清样品208份（乳猪血清样品31份、保育仔猪血清样品69份，育肥猪血清样品63份，妊娠母猪血清样品45份），死亡猪组织样品200份（心、肝、脾、肾、肺混样），流产死胎样品22份，病弱猪脐带样品86份，共计1403份样品。表1
表1 各厂区采样信息1. 1.2 仪器和耗材
仪器：全自动核酸提取仪（北京标驰泽惠生物科技有限公司），组织研磨仪（析牛科技公司）；离心机和移液枪（力辰仪器科技有限公司）；荧光PCR仪（拓赫机电科技有限公司）。
耗材：移液枪头（比克曼生物科技有限公司）；快速磁珠法DNA/RNA提取试剂盒（北京标驰泽惠生物科技有限公司）； 2 . 0 m L EP管和1.5mLEP管（力辰仪器科技有限公司）；八连排（爱思进生物技术（杭州）有限公司）;精液处理液（爱德士生物科技有限公司）；PCV3型荧光PCR检测试剂盒（内蒙古金迈诗生物科技有限公司）。
1. 1.3 PCV2引物和探针设计
猪圆环2型病毒引物和探针根据GB/T35901
设计，探针及引物均由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。表2
1. 1.4 PCV2标准品制备
所需标准品，据GenBank中公布的PCV2基因序列由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。
表2 引物和TaqMan探针序列Tab. 2 Primer and TaqMan probe sequences1.1.5 PCV3引物、探针和标准品的来源
PCV3引物、探针和标准品均由内蒙古金迈诗生物科技有限公司提供。
1.2 方法
1.2.1 试验设计
组织样品、脐带样品、死胎样品处理方式：每份样品按 
的重量剪取后放入 2 . 0 m L 无菌EP管中，加入适量灭菌生理盐水，经组织研磨仪研磨后放离心机， 
离心 
，取上清液1 . 0 m L ，置于无菌 1 . 5 m L EP管中， - 2 0 % 冰箱保存备用。
血清处理：全血常温静置，析出血清并转移血清至 1 . 5 m L 无菌EP管内， 
离心5m i n ，取血清上清液 1 . 0 m L 置于 1 . 5 m L 无菌EP中，标记血清信息，放入 
冰箱冷冻保存备用。
精液处理：取 1 m L 精液样本于 1 . 5 m L 的离心管中， 1 2 0 0 0 r / m i n 离心 4 m i n ，弃上清留沉淀，加入 4 0 0 μ L ReaL PCR 
缓冲液（精液处理液）吹打混匀后 7 0 % 温浴 
离心 1 m i n ，取 4 0 0 μ L 澄清裂解液于管中 1 . 5 m L 的离心管中备用。标记好样品信息进行检测。
1. 2.2 核酸提取。
预封装试剂准备：从试剂盒中取出预封装试剂，多次颠倒使融珠重悬，轻轻摇动孔板，使试剂和磁珠集中在孔板底部，小心撕去铝箔封口膜，使用前请确认板子方向。撕封口膜时避免振动，防止液体溅出。
自动化仪器提取步骤：在96孔板试剂的第1列和第7列（注意有效工作孔位）中加入 3 0 0 μ L 样本（投入体积可兼容 1 0 0 ～ 4 0 0 μ L 。将96深孔板放入核酸提取仪中，装上磁棒套，确认磁棒套安装到位，进行自动化提取。自动化程序结束后，将第6列和12列孔中（注意有效工作孔位）的洗脱液转移至干净的离心管中；如不立刻使用，请将洗脱立物置于 - 2 0 % 保存。
1.2.3检测
1.2.3.1 PCV2检测
（1）将PremixExTaq、引物、探针（要注意通光放置）RNaseFree 
和持检测样品已提取好的DNA，充分混后置于冰盒上待用。
（2）在 0 . 2 m L PCR八联排中、Premix Ex Taq（ProbeqPCR）试剂盒说明书比例配制试剂。 2 × Premix E x Taq为 1 2 . 5 μ L ，分别为PCV2上游引物1 μ L 、PCV2下游引物 1 μ L 、PCV2探针 1 μ L 、RNase free 
和总体积 2 4 μ L 。
（3）在上述（2）分装好的反应体系中加人2μ L 的样品。
（4）将配制好的试剂，放入PCR仪中进行扩增，反应条件： 5 0 % 预反应 
反应10
，扩增40个循环，在
时收集荧光
（5）荧光定量PCR通道选择：为FAM（PCV2）单通道。
（6）阳性：被检样品 C t 值 ⩽ 3 5 并出现特异性扩增曲线为阳性；可疑：被检样品 C t 值 gt; 3 5 并出现特异性扩增曲线，判为可疑，需进行复测；如仍是可疑则判为阳性。阴性：被检样品无 C t 值。对于某些未呈现S型曲线，但本底较高的样品，应判定为阴性。
1.2.3.2 PCV3检测程序
（1）取出PCR反应液A和PCR反应液B，待其融化后，充分混匀、瞬时离心后放置于冰盒上备用。
（2）反应体系配制：PCR反应液A 2 . 0 μ L× 
，PCR反应液 B 2 1 . 0 μ L× （ n + 1 ） ，总体积为 2 3 . 0 μ L× （ n+ 1 ） 。
（3）根据待测样品、阴性对照、阳性对照总数量，准备 0 . 2 m L PCR八联管，向每个管中加入23μ L PCR反应体系。
（4）吸取上样品核酸、阴性对照和阳性对照各 2 μ L ，加人对应 0 . 2 m L PCR八联反应管中，盖好管盖转移到扩增区。
（5）反应程序设定： 
预反应 
反应5s 
，扩增40个循环，在 5 7 % 时收集荧光。
（6）荧光定量PCR通道选择：为FAM（PCV3）单通道。
（7）结果判定：若待检样品的扩增曲线呈标准S曲线，且 Ct 值 ⩽ 3 5 ，则结果判定为阳性。若待检样品 C t 值 gt; 3 8 ，则结果判定为阴性。若待检样品 3 5 lt; C t 值 lt; 3 8 ，则结果判定为可疑，即该样品需复检。
1.3 数据处理
阳性样品提交圣湘生物科技股份有限公司测序，样品编号为 P C V 3- X J- 0 0 7 和PCV3-XJ-008。将测序结果在NCBI网站进行比对，将样本序列与从GenBank数据库中下载的参考序列进行序列分析。使用MEGA7程序构建系统进化树，使用Megaligement进行同源性分析。
2 结果与分析
2.1 不同场区PCV2和PCV3阳性率比较
研究表明，检测的7个规模化养猪场均存在PCV2和PCV3感染。其中有45份样品中检出PCV2阳性，阳性率为 3 . 2 1 % ；有463份样品中检出PCV3阳性，阳性率为 3 3 . 0 0 % ；只有11份样品同时检测为PCV2和PCV3阳性，检出率为0 . 7 8 % 。其中，C场阳性率最高，PCV2阳性率为7 . 4 6 % ，PCV3阳性率为 6 4 . 1 8 % （36/134），PCV2和PCV3混合感染率为 3 . 7 3 % ；F场阳性率最低，PCV3阳性率为 2 . 7 5 % （10/364），PCV2无检出。PCV3在新疆规模化养猪场流行率远高于PCV2，且出现PCV2和PCV3混合感染。表3
表3 各猪场PCV2和PCV3阳性率变化Tab.3 ChangesofthePCV2andPCV32.2 不同类型样品PCV2和PCV3阳性率比较
研究表明，在各类型样品中，乳猪睾丸液样品PCV2和PCV3阳性率最高，PCV2阳性率为4 . 7 8 % （25/523）；PCV3阳性率为 5 7 . 3 6 % （ 
523），PCV2和PCV3同时检出的样品有乳猪丸液（3. 7 3 % ，5/523）脐带样（ 1 . 9 2 % ，3/86）组织样 （ 1 . 7 5 % ， 3 / 2 0 0 ） 。表4
2.3 不同阶段猪群血清 P C V2 + P C V3 阳性率
研究表明，在208份血液样品中，PCV2阳性检出率最高的是乳猪血清 3 . 2 3 % （1/31）;PCV3阳性检出率最高的是乳猪血清 4 8 . 3 9 % （15/31）。仅1份乳猪血清同时检出PCV2和PCV3，检出率为 3 . 2 3 % 。表5
2.4 不同季度样品PCV2和PCV3阳性率
研究表明，在1403份样品中，第1季度检测252份样品，第2季度检测486份，第3季度检测501份，第4季度检测164份。PCV2阳性率从高到低依次是第4季度 5 . 4 9 % （9/164）第1季度4 . 3 7 % （11/252）第2季度 2 . 6 7 % （13/486）第3季度2. 4 0 % （12/501）;PCV3阳性率从高到低依次是第3季度 3 6 . 3 3 % （182/501）、第2季度3 3 . 9 5 % （165/486）第1季度 2 8 . 1 7 % （71/252）、第4季度 2 7 . 4 4 % （45/164）。PCV3在1年4季的检出率均较高。表6
表4 各类型样本PCV2和PCV3阳性率
表5样品血清PCV2和PCV3检出率Tab.5 SerumPCV2andPCV3
表6 各季度样品PCV2和PCV3阳性率 Tab.6PositivedetectionratesofPCV2 andPCV3perquarterofsamples2.5 基因序列的比较
研究表明， P C V 3- X J- 0 0 7 与参考序列之间的同源性最高的为福建KP1株（MF589111.1）9 9 . 7 % ，与参考序列之间的同源性最低的是新疆株、广西株为 9 8 . 3 % 。 P C V 3- X J- 0 0 8 与参考序列之间的同源性最高的为江西S1株（MF589133）9 9 . 4 % 。与参考序列之间的同源性最低的是江西62株（KY075989）为 9 8 . 8 % 。图1
2.6 PCV3ORF2基因遗传进化
研究表明， 
与福建株MF589111和福建株MF589108属于同一分支，为PCV3c型毒株。PCV3－XJ-008 与江西株MF589133和江西株MF589107属于同一分支，为PCV3b型毒株。
3讨论
3.1PCV2感染后会影响仔猪生，引起母猪繁猪障碍，且保育猪和生长育肥猪会出现体型消瘦和咳嗽、打喷嚏等呼吸系统疾病2]。PhanTG等[3]报道了PCV3在患病母猪中检出。PCV3可以引起多系统炎症综合征、繁殖障碍疾病、猪皮炎与肾病综合征以及亚临床感染，影响猪群健康状态，但不会表现出明显的临床症状。
3.2回卫荣等报道显示，2015至2019年河北省PCV2的感染率为 4 4 . 0 8 % ～ 8 6 . 8 9 % ，PCV3阳性率为 2 5 . 6 % ，而PCV2和PCV3混合感染率为1 2 . 1 % 。甘雨等[10]报道，在1408份样品中，PCV2阳性率为 5 1 . 9 2 % （731/1408），PCV3阳性率为3 3 . 4 5 % （471/1408），PCV2和PCV混合感染率2 5 . 0 7 % （353/1408）。钟顺平等[1研究表明，在
2019年云南省勐腊县PCV2阳性检出率为 3 6 . 0 5 % （31/86），PCV3阳性检出率 1 7 . 4 4 % （15/86），PCV2和PCV3混合感染率为15. 12 % （13/86）。颜友荣等[调查表明，苏中地区PCV2阳性率为 1 0 . 7 % （39/363）。陈翔鸿等[3调查表明，2019年至2020年我国中南地区猪场中猪PCV2阳性率为 3 6 . 0 8 % （616/1707）。黄正波等[14]研究表明，2021年东北地区PCV2阳性率为 1 9 . 0 0 % （38/200）。高诗敏等[15]对2019年山西省PCV3 阳性率调查结果显示，阳性率为 8 5 . 2 2 % （444/521）。刘文波等[在2020至2022年广西猪圆环病毒3型调查发现，样品阳性率为 1 7 . 8 3 % （ 4 1 / 2 3 0 ） 。黄梦杰等[17对2021至2022年山东省1040份样品检测。结果显示PCV3检出率为 2 . 3 % （24/1040），不同季节和阶段均可检出。刘东旭等[18]在吉林省研究调查表明PCV3阳性率为 3 4 . 2 % （ 2 4 1 / 7 0 4 ） 。李蕊等[9]对北京市的调查研究显示PCV3总体阳性率为 1 . 0 % （12/1177）。李静等[20在2019年9月至2020年12月期间对新疆阿克苏地区、巴音郭楞蒙古自治州、伊犁哈萨克自治州等6个地区PCV3阳性率研究表明，北部地区PCV3平均阳性率为 1 4 . 5 % （ 6 5 / 449）。袁科等21报道，在2021年10月至2022年7月新疆北部地区PCV3阳性率为 2 4 . 1 5 % （107/443），且不同阶段猪群均可感染。莫绍江等[22]调查表明，阿克苏部分地区PCV3阳性率为 7 . 5 3 % （44/584）。
3.3研究表明，新疆PCV2总体阳性率 3 . 2 0 % ，低于苏中地区的 1 0 . 7 % ；低于中南地区的 3 6 . 0 8 % ;低于东北地区的 1 9 . 0 0 % ；整体阳性率处于全国较低水平，PCV3总体阳性率为 3 3 . 0 % （463/1403），高于李静等（ 1 4 . 5 % ）、袁科等（ 2 4 . 1 5 % ）和莫绍江等（ 
的研究结果，相较于山西低5 2 . 2 2 % ；比山东高 3 0 . 7 % ；比北京高 3 2 . 0 0 % ；比广西高 1 5 . 1 7 % ，与甘雨等[10]（ 3 3 . 4 5 % ，471/1408）和刘旭东等[18]（ 3 4 . 2 % 2 4 1 / 7 0 4 ）研究结果相接近。PCV2和PCV3混合感染率（ 7 . 8 4 % ）低于河北0 1 2 . 1 % ）、云南（ 1 5 . 1 2 % ）混合感染率。目前尚无一款商品化PCV3疫苗，解除PCV2感染造肥的机体免疫抑制，增强自身健康情况，降低PCV3感染风险[23]，减少PCV2和PCV3混合感染率。
4结论
目前，在新疆PCV2阳性率为 3 . 2 0 % （ 4 5 / 1403），PCV3流行率达 3 3 . 0 0 % （463/1403），
PCV2和PCV3混合感染率为 7 . 8 4 % （11/1403）。C 场PCV2和PCV3阳性检出率最高，PCV2为7 . 4 6 % （10/134），PCV3为 6 4 . 1 8 % （36/134），PCV2和PCV3混合感染率为 3 . 7 3 % （5/134）。新生乳猪睾丸检出PCV2和PCV3阳性率最高，PCV2阳性率为 4 . 7 8 % （25/523）;PCV3检出率为5 7 . 3 6 % （300/523）。PCV2和PCV3不仅可以感染不同阶段的猪只，而且一年四季感染率较高。新疆部分地区，PCV2感染率处在全国低等水平，PCV3感染率处于全国中等水平，且新疆部分地区PCV3流行毒株为PCV3b和PCV3c型。
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Monitoring of Porcine circovirus （PCV） types 2 and 3 in some large - scale pig farms in Xinjiang
QI Weiyi1，XU Heng²，LIU Yingyu¹，ZHENG 
XIA Lining，LIU Junfei²
（1. College of Animal Medicine， Xinjiang Agricultural University， Urumqi 830o52，China; 2. Xinjiang Tekon Animal Husbandry Science and Technology Co. Ltd. ，Changji Xinjiang 8311oo， China）
Abstract：【Objective】 To investigate the prevalence of Porcine circovirus type 2（PCV2） and Porcine circovirus type 3（PCV3）in Xinjiang.【Methods】From October 2022 to September 2023，1403 samples from 7 large- scale pig farms were detected and sequenced by fluorescent quantitative PCR. 【Results】The overall positive rate of PCV2 was 3 ， 2 0 % （45/1403），the overall positive rate of PCV3 was 3 3 . 0 0 % （463/ 1403），and the combined infection rate of PCV2 and PCV3 was 7 . 8 4 % （11/1403）. The positive detection rate of PCV2 and PCV3 in C field was the highest，with PCV2 7 . 4 6 % （10/134），PCV3 64.18%（36/134）， and PCV2 and PCV3 mixed infection rate 3 . 7 3 % （5/134）. The positive rate of PCV2 and PCV3 was the highest，and the positive rate of PCV2 was 4 . 7 8 % （25/523）. The detection rate of PCV3 was 57.36%（300/ 523）．The detection rates of PCV2 and PCV3 were high in allseasons，and the PCV3 strain was PCV3b and PCV3c.【Conclusion】PCV3 infection has been found in some large - scale pig farms in Xinjiang and the prevalence rate of PCV3 is much higher than that of PCV2，and PCV3 strain is PCV3b and PCV3c.
Key words：Porcine circovirus type 3； Porcine circovirus type 2； fluorescent quantitative PCR； pig
